傷口愈合試驗簡介

傷口愈合試驗或劃痕試驗是研究體外集體細胞遷移的常用方法。該方法基于以下觀察：在匯合的細胞單層上產生人工間隙（“劃痕”）后，劃痕邊緣的細胞將向開口遷移并建立新的細胞-細胞連接，從而關閉差距。傷口愈合測定的初始步驟包括在細胞單層中創建劃痕，隨后在多個時間點捕獲圖像以監測間隙閉合的進展，以及間隙閉合百分比和/或細胞遷移率的量化1 .

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研究人員可以使用這些 CytoSMART 設備進行傷口愈合實驗：全板掃描儀Omni、熒光細胞成像儀Lux3 FL、迷你活細胞成像儀Lux2和Lux3 BR。
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使用活細胞成像進行傷口閉合分析

使用板成像儀 CytoSMART Omni 的功能，用戶可以研究多孔板中細胞的遷移模式并比較多種處理/條件。在這里，進行了傷口愈合試驗以研究 C6 大鼠神經膠質瘤細胞的遷移。CytoSMART Omni 允許用戶可視化間隙閉合的進程，提供多個孔的概覽（圖 1A）以及放大選定的孔或劃痕區域（圖 1A；圖 2））。集成的圖像分析算法會自動突出顯示（藍色；圖 1A）缺少細胞的孔區域；它還量化了間隙表面閉合（圖 1B）和細胞遷移速度（圖 1C）。

圖 1 | C6膠質瘤細胞遷移分析。將 C6 大鼠神經膠質瘤細胞接種在 48 孔板中，用移液器吸頭弄傷，并使用 CytoSMART Omni 監測 17 小時。(A) 集成圖像分析算法自動選擇無細胞（“劃痕”）區域（以藍色突出顯示）并監控劃痕閉合在指定時間段內的進展。生成的輸出提供了有關 (B) 劃痕隨時間變化的區域和 (C) 細胞遷移速度的信息。(B) 和 (C) 顯示 (A) 中所示的四口井的間隙閉合數據。

圖 2 | C6 膠質瘤細胞遷移和劃痕閉合的延時視頻。將單層 C6 大鼠神經膠質瘤細胞鋪在 48 孔板的一個孔中，用移液器吸頭劃傷，并使用 CytoSMART Omni 通過全孔概覽進行記錄。每小時采集一次明場圖像，共持續 23 小時。

CytoSMART Omni：樣品的有效比較

另一個例子突出了使用 CytoSMART Omni 對多個測試樣本進行高通量比較的優勢。在下面的視頻中，將 NIH-3T3 小鼠成纖維細胞接種在單個 96 孔板中，并用一系列濃度的肌球蛋白 II 抑制劑 blebbistatin 和肌動蛋白聚合抑制劑 cytochalasin D 進行處理。接下來，對細胞進行處理體外劃痕試驗。使用 CytoSMART Omni 以 1 小時的成像間隔捕獲圖像 48 小時。結果表明，增加 blebbistatin 和 cytochalasin D 的濃度會抑制 NIH-3T3 細胞遷移（圖 3）。

圖 3 | 用 blebbistatin 和 cytochalasin D 處理后的 NIH-3T3 細胞遷移分析。 用 blebbistatin 和 cytochalasin D處理 NIH-3T3 小鼠成纖維細胞的單層，用移液器吸頭受傷，并監測 48 小時（1 小時成像間隔）使用 CytoSMART Omni。藍色區域定義了孔中缺少細胞的部分（“劃痕”）。白紫色箭頭表示添加化合物的濃度增加。比例尺 = 1000 μm。

參考

1. Liang, C.-C., Park, A. Y. & Guan, J.-L. In vitro scratch assay: a convenient and inexpensive method for analysis of cell migration in vitro. Nat. Protoc. 2, 329–333 (2007).