克隆基因檢測簡介

克隆形成測定或菌落形成測定是一種體外 細胞存活測定，可評估單細胞在治療中存活并繁殖以形成菌落1的能力。最初開發克隆形成試驗是為了研究輻射對哺乳動物細胞的影響。最近，它們已被廣泛用于測試抗血管生成劑和細胞毒劑、化學療法和基于細胞因子的藥物對腫瘤細胞和正常細胞2的功效。

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使用 CytoSMART Omni 活細胞成像儀，您可以分析和量化集落形成。在此處了解有關 Omni 的更多信息。

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用于分析集落形成的活細胞成像

活細胞成像可以解決傳統克隆方案的缺點。首先，活細胞成像允許長時間監測菌落生長，而不會將數據采集限制在單一時間點。這允許收集有關特定治療后細胞存活的更多信息，并實時觀察細胞分裂和集落形成。通過連續成像，可以在更早的發育階段檢測到菌落形成，從而比采用傳統方法更快地得出結論。沒有端點固定或染色 步驟進一步減少了進行克隆形成測定所需的時間和材料。此外，集成的圖像分析軟件會自動檢測新形成的菌落并評估其大小和圓形度。這不僅加速了數據分析，而且減少了分析結果解釋中的偏差和主觀性。

在下面的示例中，使用 CytoSMART Omni 對經過一系列阿霉素濃度處理的 CHO-K1 細胞進行了為期 7 天的成像。該測定在24孔板中進行，該板保持在37℃的標準CO 2培養箱內。

使用 CytoSMART 菌落檢測算法，在單個孔中形成的細胞簇（即菌落）被自動量化（圖 1A）并以橙色突出顯示（圖 1B）。這允許在整個潛伏期 (圖 2A ) 中監測和量化細胞增殖和集落形成, 而不會錯過任何關鍵時間點, 因為它通常發生在使用傳統方法進行克隆化檢測時。該算法還跟蹤菌落大小（圖 2B）和圓度（圖 2C）的變化。

圖 1 | 未經處理的 CHO-K1 細胞在 7 天內的集落形成能力分析。(A) 集成菌落檢測算法自動檢測并計算每孔的菌落數。(B) 放大特定井后，菌落掩碼覆蓋突出顯示單個細胞簇。

圖 2 | 多柔比星在體外可減少 CHO-K1 細胞的增殖和集落形成。(A) 測試板的輪廓。(B)未處理 (CTRL) CHO-K1 細胞和用 0.2 μM、0.5 μM、1.0 μM、2.0 μM 和 5.0 μM 阿霉素處理的細胞的存活曲線，以及 (C) 平均菌落大小和 (D) 的變化) 約 7 天的循環。

參考

1. Franken, N. A. P., Rodermond, H. M., Stap, J., Haveman, J. & van Bree, C. Clonogenic assay of cells in vitro. Nat. Protoc. 1, 2315–2319 (2006).

2. Munshi, A., Hobbs, M. & Meyn, R. E. Clonogenic Cell Survival Assay BT - Chemosensitivity: Volume 1 In Vitro Assays. in (ed. Blumenthal, R. D.) 21–28 (Humana Press, 2005). doi:10.1385/1-59259-869-2:021.